甲硫氨酸维生素B₁氯化钠注射液的研制

温天文¹,廖联明,刁勇(1.南京迈特发医药科技有限公司,江苏 南京,210008)

[摘要] 目的：将原有国家标准的甲硫氨酸维B₁注射液小针剂，研制成100ml的氯化钠大输液，以满足患者的需求和医生的临床用药。方法：以提高药物的含量和稳定性来摸索本制剂的处方，采用高效液相色谱法（HPLC）建立本品含量质量控制方法，并进行稳定性考察。 结果：确定了本品的处方、配制工艺、质量控制方法及有效期。结论：本品处方、质量控制方法安全有效、科学合理，稳定性良好;符合《中国药典》2005年版二部注射剂项下有关的各项规定。  

[关键词] 甲硫氨酸；维生素B₁；高效液相色谱法；含量测定；稳定性   

The prepare of  Methionine VitamineB₁ and Sodium Chloride Injection

WEN Tian-wen¹,LIAO Lian-ming，DIAO Yong (1.Nanjing Maitefa medical science technology Co.,Ltd, Nanjing 210008,China)

[Abstract] Objective: According to the original national standard of Methionine and VitamineB₁ injection, we produced  the Methionine VitamineB₁ and Sodium Chloride Injection of 100ml/botlle in order to satisfy the need of patients and provide a clinically more convenient medication.Methods: The formula and preparative process were selected in an effort to increase the  stability of the injection,and hight performance liquid chromatography(HPLC) was used to establish the method of quality control and stability study.  Results: The prescription, preparation process, the method of quality control and the shelf life of the injection were determine.Conclutions: The prescription and the method of quality control are feasible and reasonable.The stability of the injection meet the  standard specified in the current Chinese Pharmacopeia.  

[Key words] Methionine ；VitamineB₁；HPLC；assay；stability

国内临床使用甲硫氨酸维B₁注射液用于改善肝脏机能，尤其对脂肪肝有明显的疗效。能改善肝内胆汁郁积，可用于酒精、巴比妥类、磺胺类药物中毒的辅助治疗；清除心脑血管的脂肪；治疗动脉硬化引起的各种疾病，并可作为治疗神经炎和心肌炎的辅助药物；对全身多种疾病有辅助治疗作用，如全身感染、高热、糖尿病、甲状腺机能亢进和妊娠期等。从方便临床用药的综合考虑，我们根据国家药品标准WS-10001（HD-1387）-2003《甲硫氨酸维B₁注射液》^[1]，研制开发了甲硫氨酸维生素B₁氯化钠注射液（100ml：甲硫氨酸100mg、维生素B₁10mg）。

1 材料和方法[１]

1.1 仪器与试药

1.1.1  原料来源：甲硫氨酸（含量99.2%），维生素B₁（含量99.88%）和药用氯化钠（含量99.9%）分别购自天津天安药业股份有限公司、东北制药总厂、云梦云虹制药有限公司。对照品来源：甲硫氨酸、维生素B₁，均购自中国药品生物制品检定所。

1.1.2色谱仪：HP1100型高效液相色谱仪、紫外检测器（美国惠普），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）。色谱柱：Lichrospher-C₁₈，5μ，250×4.6mm（淮阴汉邦科技有限公司）。

1.1.3试剂：甲醇，色谱纯，南京化学试剂一厂；已烷磺酸钠，色谱纯，山东禹王实业有限公司禹城化工厂；三乙胺，色谱纯，宜兴市化学试剂三厂。

1.2  处方设计

本制剂为大输液，因此应考虑溶液的等渗等张、pH、无菌、澄明度、不溶性微粒等，且不加任何附加剂。

1.2.1  溶剂的选择  据于甲硫酸氨、维生素B1均溶于水、化学性质较稳定特点，且本制剂为大输液，因此选择无菌注射用水为溶剂，不加任何附加剂。

1.2.2  调渗剂的选择  输液的常用等渗调节剂是氯化钠、葡萄糖，通过这二种配伍后的药液进行蒸发灭菌，观察其灭菌后的澄明度及是否出现沉淀或絮状现象，从而筛选合适的等渗调节剂。

1.2.3  pH的选择 根据甲硫酸氨、维生素B1原料的理化性质及人体生理适应性为主要指标，进行确定本注射液的pH值。

1.3  配制工艺

1.3.1  溶解水温 分别在将灭菌注射用水温度控制在室温、40℃、60℃进行溶解配制，从而确定最适合工艺操作的温度条件。

1.3.2  溶解的pH 由于甲硫酸氨、维生素B1原料均为水溶性原料，因此配制本注射液时对溶液的pH值要求，控制在注射液本身质量控制范围即可。

1.3.3  溶液脱色 从大输液的热原、溶液颜色、澄明度、重金属等考虑，在彻底溶解后的溶液中加入适量注射用药用碳，在60℃条件下，充分搅拌、脱色，20min，趁热过滤。

1.3.4  溶液精滤 为进一步保证注射液的溶液颜色与澄清度、澄明度、不溶性微粒、无菌等，将脱色滤过后的滤液，再经0.22μ无菌滤膜滤过。

1.3.5  灭菌条件 为确保本大输液无菌，取小试样品300瓶，在不同灭菌条件下各100瓶进行灭菌，考察注射液的含量、有关物质、溶液颜色、澄明度等变化情况。

1.4  建立质量控制方法及制备标准曲线

系统适应性试验与色谱条件^[2--4]  色谱仪：HP1100型高效液相色谱仪、紫外检测器（美国惠普），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；色谱柱：Lichrospher-C₁₈，5μ，250×4.6mm（淮阴汉邦科技有限公司）；流动相：己烷磺酸钠溶液（取己烷磺酸钠0.216g，加水1000ml溶解后，加三乙胺2ml，用磷酸调节pH值至2.5）-甲醇（90：10）；流  速：1.0ml/min；波  长：210nm；进样量：20μl；柱  温：40℃。

1.4.1  甲硫氨酸标准曲线^[4]：取甲硫氨酸对照品约200mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0、2.0、2.5、3.0、5.0ml分别置10 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录V D^[2]），各取20μl注入液相色谱仪，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。

1.4.2  维生素B₁标准曲线：取维生素B₁对照品约20mg，精密称定，置50 ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0、2.0、2.5、3.0、5.0ml分别置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录V D），各取20μl注入液相色谱仪，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。

1.5  稳定性考察

取本品在高温（60℃）、高湿(RH92.5%)和光照（4500Lx）条件下各放置5、10天，结果表明各考察项与0天比较无明显变化。在40℃、RH75％条件下加速试验6个月,25℃、RH60%条件下长期试验24个月。

1.6  样品测定

1.6.1  含量测定：取本品内容物适量（约相当于甲硫氨酸40mg），置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含0.4mg的甲硫氨酸和0.04mg的维生素B₁溶液，作为供试品溶液；另精密称取甲硫氨酸对照品适量，加水制成每1ml中含0.4mg的甲硫氨酸溶液，摇匀，即为对照品溶液（Ⅰ），再精密称取维生素B₁对照品适量，加水制成每1ml中含0.04mg维生素B₁溶液，摇匀，即为对照品溶液（Ⅱ），分别取上述三种溶液20ul注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，即得。

1.6.2  其他  取本品经测定，按注射剂项下有关的各项规定（《中国药典》2005年版二部附录IB）进行测定。

2  结果

2.1  处方的确定

2.1．1  pH的确定  甲硫氨酸pH值为5.6～6.1，维生素B₁  pH值为2.8 ～3.3 。国家药品标准WS-10001（HD-1387）-2003甲硫氨酸维B₁注射液质量标准中,酸度为3.5～6.5。因此，将本品 pH按国家药品标准控制在3.5～6.5。                                   

2.1.2  等渗调节剂  分别用氯化钠、葡萄糖为等渗调节剂配制的样品，分别进行在105℃,30min、115℃，20min、120℃，15min灭菌发现，采用氯化钠为等渗调节剂所配制的样品灭菌后溶液色泽、澄明度均比采用葡萄糖为等渗调节剂所配制的样品要好。因此，采用氯化钠为等渗调节剂。

2.1.3  处方（规格：100ml：甲硫氨酸100mg、维生素B₁10mg ）

甲硫氨酸                    100g

维生素B₁                    10g

氯化钠                      900g

              注射用水      加至          100.0L

共制成                      1000瓶

2.2  配制工艺的确定

2.2.1  配制时溶解的温度  分别在20℃、40℃、60℃、80℃下进行配制溶液，发现四种情况下配制的溶液的色泽均无明显变化；无菌注射用水在40℃、60℃、80℃时的溶解速度均快于20℃（室温）时溶解速度，但80℃时主药含量比40℃、60℃时略有下降，后二者差别不大。因此，从溶解速度、药物含量、生产操作等综合考虑，将配制温度控制在60℃较为合理。

2.2.2  脱色针用活性炭的用量  针用活性炭的用量分别在0.025%、0.05%、0.1%、0.15%下配制的溶液，甲硫氨酸含量分别为：99.8%、99.2%、97.7%、95.6%维生素B1含量分别为：99.0%、97.9%、96.7%、94.8%。从结果可知，针用活性炭用量对药物含量有所影响，尤其是对维生素B₁的含量影响更大，为了保证溶液颜色、澄明度、热原，尽量减少主药的损失，因此，将针用活性炭用量控制在0.025%为宜。

2.2.3  灭菌条件 分别在105℃,30min、115℃，20min、120℃，15min各考察指标结果如下表I：

项目		105℃,30min		115℃，20min		120℃，15min
数量（瓶）		96	4	85	15	73	27
色泽		无色	淡黄	无色	淡黄	淡黄	黄色
澄明度*		-	-	-	-	-	+
pH值		5．43	5．51	5．82	6．10	6．50	6．43
含量	Meth	99．1	98．9	98．4	97．5	96．2	96．3
	VB1	98．5	98．7	97．8	96．6	96．0	95．2
有关物质		0．03	0．04	0．04	0．05	0．08	0．07

*澄明度：“-”表示“符合规定”，“+” 表示“不符合规定”。

 由上表结果可见，本品最佳灭菌条件为105℃,30min。

2.2．4  配制工艺  在无菌称量间内分别称取处方量的甲硫氨酸、维生素B₁、注射用氯化钠，加入注射用水适量，搅拌使其溶解，用1%盐酸溶液调pH值在4.0～5.5范围内；调节渗透压在290～310moSmol/L,加水至全量，加入0.025%的针用活性炭，40℃搅拌20分钟后，用无菌砂芯过滤脱炭，再用微孔滤膜（0.22μm）精滤，滤液经质检合格后，灌装于100ml输液瓶中，每瓶灌装100ml，加涤纶薄后，加塞,轧盖，流通蒸汽105℃灭菌30min, 灯检合格后，将合格品进行包装，即得。

2.3  含量控制方法与标准曲线

2.3.1  甲硫氨酸标准曲线 测定结果见表II及图I：

表II  甲硫氨酸线性测定结果 

浓度（μg/ml）	161.2	322.4	403.0	483.6	806.0
峰面积(A)	789592	1715255	2079175	2529445	4155339
回归方程	A=5186.5C-3590.2；r=0.9995

 

图I甲硫氨酸标准曲线

结论：甲硫氨酸浓度在161.2~806.0μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3.2  维生素B₁ 标准曲线  测定结果见表III及图II：

表III   维生素B₁线性测定结果

 

图II维生素B₁ 标准曲线

结论：维生素B₁浓度在16.16~80.80μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.4  稳定性考察 

经稳定性考察，结果表明影响因素试验、加速试验、长期试验各考察项与0月比较均无明显变化。说明本品在此包装条件下质量较为稳定，参照国家药品标准甲硫氨酸维生素B₁注射液的有效期，故本品有效期暂订为24月。

表IV   甲硫氨酸维B1氯化钠注射液长期试验结果

批号	时间 （月）	性状	pH	澄明度	溶液 澄清度与颜色	有关物质（%）	甲硫氨酸 （%）	VB1 （%）
040320	0 3 6 24	无色澄明液体 无色澄明液体 无色澄明液体 无色澄明液体	4.48 4.52 4.60 4.64	符合规定 符合规定 符合规定 符合规定	澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号	0.020 0.027 0.025 0.030	103.32 103.56 103.41 103.08	102.29 102.57 102.18 102.28
040322	0 3 6 24	无色澄明液体 无色澄明液体 无色澄明液体 无色澄明液体	4.50 4.54 4.56 4.66	符合规定 符合规定 符合规定 符合规定	澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号	0.020 0.026 0.030 0.033	104.27 104.18 104.20 104.28	103.17 103.37 103.18 103.28
040324	0 3 6 24	无色澄明液体 无色澄明液体 无色澄明液体 无色澄明液体	4.46 4.58 4.52 4.64	符合规定 符合规定 符合规定 符合规定	澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号 澄清＜黄色1号	0.022 0.023 0.025 0.029	102.36 102.19 102.37 102.17	101.24 101.33 101.19 101.14

2.5  样品测定

2.5.1  样品含量测定结果见表VII：

表VII  含量测定结果

结论：本品三批样品的含量均在90%-110%范围内。

2.5.2  其他  经检验，其他项均符合注射剂项下有关的各项规定（《中国药典》2005年版二部附录IB）。

3  讨论

3.1  本制剂酸度的控制是按国家药品标准WS-10001（HD-1387）-2003甲硫氨酸维B₁注射液质量标准中,酸度为3.5～6.5进行控制。在研究中发现将其酸度控制在5.6左右,本品甲硫酸氨、维生素B₁含量较高且较稳定。

3.2  采用针用活性炭过滤时，活性用量对维生素B₁有较明显的吸附作用。因此，控制其用量。

3.3  灭菌温度和时间也是影响本制剂质量的一个重要因素。灭菌温度过高、时间过长将影响本品含量下降、有关物质增加、溶液颜色及澄明度不合格。在影响因素试验中，发现光照会使本品含量略有下降、溶液颜色略有加深。因此，其贮藏应避光。

经上述研究，表明本品处方、制备工艺安全、可靠，质量控制方法及有效期的确定切实可行、科学合理。

 

参 考 文 献:

[1] 国家药品标准(化学药品地方标准上升国家标准第十五册)[S]2003.08.

[2] 纪宇,刁勇,卢懿. 高效液相色谱法测定甲硫氨酸维B₁的含量[J] .中国生化药物杂志,2005,26(4):228-229.

[3] 黄榕珍.高效液相色谱法测定甲硫氨酸维生素B1注射液中甲硫氨酸和维生素B1的含量[J] .海峡药学,2005,17(4):42-45.

[4] 徐晖，马骉,卢懿.HPLC测定注射甲硫氨酸维生素B₁中甲硫酸氨的含量[J] .华西药学杂志,2006,21(2):210-211

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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