酶是生物活性物质，酶的保存对其生物活性的发挥很重要，目前很多酶均以冻干粉的形式保存，冷冻干燥对酶的保护虽然很有效，但对有些酶而言，冷冻干燥比冻融法更易破坏酶的催化功能[1]。不过在冷冻干燥时加入糖，可使蛋白质分子受到保护。很多分子在溶液中对蛋白质起稳定作用，如氨基酸，糖类，某些盐类等，但只有糖类既能在干燥条件下起保护作用，又能在溶液中对蛋白质起稳定作用。本文就海藻糖，乳糖，葡萄糖等糖类，柠檬酸，草酸，磺基水杨酸等有机酸对ＳＯＤ活力的影响作了初步研究。
1、材料和方法
（1）材料与试剂
牛血ＳＯＤ冻干粉(酶比活(3000Ｕ/ｍｇ ｐｒｏ) 上海宝安生物技术公司；
三羟甲基氨基甲烷(Ｔｒｉｓ) 进口分装；
连苯三酚ＡＲ 贵州遵义化工厂；
海藻糖 上海宝安生物技术公司研制。
其它试剂均为国产分析纯。
（2）方法
ＳＯＤ活力测定
改进的连苯三酚自氧化法[2]。
糖对ＳＯＤ活性的影响
在一定量的酶反应体系中，分别加入不同浓度的海藻糖，乳糖，葡萄糖，均隔2ｈ，24ｈ和48ｈ后取样测定活力，以不加糖的ＳＯＤ溶液的起始活力作对照(100%)，测定酶活力保留率。
有机酸对ＳＯＤ活力的影响
在一定量的酶反应体系中，分别加入0 1，0 2，和0 5ｍｏｌ/Ｌ的柠檬酸，草酸，磺基水杨酸，隔24ｈ和48ｈ后取样测活，以不加酸的ＳＯＤ溶液的起始活力作对照，测定酶活力保留率。以上实验均在25℃的条件下进行。
2、结果
（1）糖类对ＳＯＤ活力的影响
海藻糖对ＳＯＤ活力的影响
不同浓度的海藻糖溶液对ＳＯＤ活力的影响，见图1(以不加海藻糖的ＳＯＤ溶液作对照)。由图1可看出，不同浓度的海藻糖溶液均可提高酶活力，说明海藻糖具有保护ＳＯＤ酶活力的作用，以0 28ｍｏｌ/Ｌ的海藻糖溶液保护作用最明显，随着时间的延长，海藻糖使ＳＯＤ的稳定性增加，保护作用更为明显。
葡萄糖对ＳＯＤ活力的影响
不同浓度的葡萄糖溶液对ＳＯＤ活力的影响，见表1(以不加葡萄糖的ＳＯＤ溶液作对照)。
由表1可见，葡萄糖对ＳＯＤ活力影响不明显，与不加葡萄糖的ＳＯＤ对照相比，葡萄糖使ＳＯＤ活力略有下降。
乳糖对ＳＯＤ活力的影响
不同浓度的乳糖溶液对ＳＯＤ活力的影响结果见图2(以不加乳糖ＳＯＤ溶液作对照)。
由图2可见，乳糖对ＳＯＤ活力的影响不明显，随着时间的延长，0 4ｍｏｌ/Ｌ乳糖使ＳＯＤ活力下降。
（2）有机酸对ＳＯＤ活力影响
柠檬酸对ＳＯＤ活力的影响
ＳＯＤ溶液中加入不同浓度的柠檬酸后，其对ＳＯＤ活力的影响结果见表2(以不加柠檬酸的ＳＯＤ溶液作对照)。
由表2可见，不同浓度的柠檬酸对ＳＯＤ的活力影响不同，而且差别比较大，0 5ｍｏｌ/Ｌ柠檬酸对ＳＯＤ活力几乎无影响，而0 1ｍｏｌ/Ｌ，0 2ｍｏｌ/Ｌ的柠檬酸对ＳＯＤ活力有显著影响，使ＳＯＤ明显失活，尤以0 1ｍｏｌ/Ｌ的柠檬酸最为明显，作用20ｈ后，几乎使ＳＯＤ完全失活。
草酸对ＳＯＤ活力的影响
ＳＯＤ溶液中加入不同浓度的草酸后，产生白色沉淀物，且Ａ值很高，结果见图3(以不加草酸的ＳＯＤ溶液作对照)。
由图3可见，不同浓度的草酸均使ＳＯＤ的活力下降，但随着浓度的增加，ＳＯＤ失活的程度却减轻，0 1ｍｏｌ/Ｌ的草酸作用20ｈ后，几乎使ＳＯＤ完全失活，而0 5ｍｏｌ/Ｌ的草酸作用48ｈ后，ＳＯＤ的活力还保留60%以上。
磺基水杨酸对ＳＯＤ活力的影响
在ＳＯＤ溶液中加入不同浓度的磺基水杨酸后，其对ＳＯＤ活力的影响结果见图4(以不加磺基水杨酸的ＳＯＤ溶液作对照)。
由图4可见，不同浓度的磺基水杨酸对ＳＯＤ活力的影响不同，均使ＳＯＤ的活力下降。且同样随着酸浓度增加，ＳＯＤ失活程度减轻，0 1ｍｏｌ/Ｌ的磺基水杨酸作用24ｈ后，几乎使ＳＯＤ完全失活，而0 5ｍｏｌ/Ｌ的酸作用48ｈ后，ＳＯＤ的活力还保存60%以上。
3、讨论
Ａｒａｋａｗａ等人的研究表明[3]，多元醇和糖类一直用来作为保护生物大分子活性的稳定剂，在蛋白质的水溶液中加入某些糖类会导致水的表面张力改变，继而引起表面自由能的改变。这是糖类与蛋白质相互作用中最为重要的因素，糖类的加入对蛋白质与水之间氢键的影响以及蛋白质表面的化学本质等也是重要的考虑因素。
加入到ＳＯＤ水溶液的海藻糖分子结构中含有许多羟基，是一种多元醇化合物，水合能力很强，一方面，海藻糖溶液中，可能会使自由能向有利的方向改变。另一方面，海藻糖的多羟基结构使它既能通过氢键与酶蛋白表面分子相连，又能通过氢键有效地与外部水相连，因而能使酶蛋白结构得到稳定，酶活力得到保护。
实验结果表明，仅海藻糖对ＳＯＤ有一定的保护作用，使ＳＯＤ稳定性增加，活力有所提高，其它糖类对ＳＯＤ活力影响不明显。有机酸均使ＳＯＤ活力下降，但浓度升高ＳＯＤ活力下降的程度却减轻。可能是由于有机酸浓度增加，水分子量减少，溶液极性减少，ＳＯＤ是蛋白质，具有两性电解质的性质，因此极性减少适合它的稳定和保存。